根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求制備樣品完畢后。即可進(jìn)行觀察?;静襟E如下:
(1)開啟儀器電源及光源:一般先開啟顯微鏡和激光器,再啟動計算機(jī),然后啟動操作軟件,設(shè)置熒光樣品的激發(fā)光波長,選擇相應(yīng)的濾光鏡組塊。以便光電倍增管(photomultipliertube,PMT)檢測器能得到足夠的信號結(jié)果。使用汞燈的注意事項同普通熒光顯微鏡。
(2)設(shè)置相應(yīng)的掃描方式:在目視模式下.調(diào)整所用物鏡放大倍數(shù),在熒光顯微鏡下找到需要檢測的細(xì)胞。切換到掃描模式,調(diào)整雙孔針和激光強(qiáng)度參數(shù),即可得到清晰的共聚焦圖像。
(3)獲取圖像:選擇合適的圖像分辨率,將樣品完整掃描后,保存圖像結(jié)果即可。
(4)關(guān)閉儀器:儀器測定樣品結(jié)束后,先關(guān)閉激光器部分,計算機(jī)仍可繼續(xù)進(jìn)行圖像和數(shù)據(jù)處理。若要退出整個激光掃描共聚焦顯微鏡系統(tǒng).則應(yīng)該在激光器關(guān)閉后,待其冷卻至少10分鐘后再關(guān)閉計算機(jī)及總開關(guān)。
聚焦離子束顯微鏡的操作注意事項及維護(hù)保養(yǎng):
(1)儀器周圍要遠(yuǎn)離電磁輻射源;
(2)環(huán)境無震動,無強(qiáng)烈的空氣擾動;
(3)室內(nèi)具有遮光系統(tǒng),保證熒光樣品不會被外源光漂白;
(4)環(huán)境清潔;
(5)控制工作溫度在5~25℃。